Tradat de familiile conducatoare din Italia, Ezio incepe sa se pregateasca pentru a deveni asasin. Ajunge astfel sa fie atras in razboiul secret dintre Ordinul Asasinilor si Ordinul Templierilor, care are drept scop obtinerea Marului Edenului, un artefact ce poate controla mintile oamenilor, provenit de la o civilizatie straveche, superioara tehnologic.